细胞周期分析PI染色法

细胞周期流式检测（PI染色法）

1. 收集细胞：若悬浮生长细胞离心弃培养基，用PBS洗涤一次（建议用PBS + 1% FBS或PBS + 0.1% BSA），若是贴壁生长细胞，加入合适体积的0.25%胰酶消化一分钟左右（可显微镜观察待细胞脱壁），吹起细胞后加入5ml 含10%血清的培养基，终止作用，转移细胞至15ml离心管中，300g 离心5分钟，用PBS洗涤细胞一次；

2. 用PBS洗涤细胞一次，300g离心5分钟后弃上清；

3. 用500ul PBS 重悬细胞，振荡混匀后加入5ml 70%冷乙醇溶液（放置在-20度预冷的70%乙醇溶液），混匀后放置4度过夜（可放置一周）；

4. 500g离心5分钟后弃乙醇，用PBS悬浮细胞洗涤细胞一次；

5. 用PBS调节细胞浓度为5 X 106个/ml,取500ul细胞悬液加入100ul  500ug/ml 的PI染色（用PBS配制500ug/ml的PI染色液），4°C避光放置30分钟；

6. 加入100ul 煮沸过的RNase A (10mg/ml) 37度孵育30分钟；

7. 混匀细胞后待上流式仪获取分析。